登录  
 加关注
查看详情
   显示下一条  |  关闭
温馨提示!由于新浪微博认证机制调整,您的新浪微博帐号绑定已过期,请重新绑定!立即重新绑定新浪微博》  |  关闭

生物专人的博客

我选择,我自由。

 
 
 

日志

 
 

2013年06月02日  

2013-06-02 08:36:10|  分类: 生物教学 |  标签: |举报 |字号 订阅

  下载LOFTER 我的照片书  |
为什么不推荐使用淀粉酶探究pH对酶活性影响

必修一第5章中“影响酶活性的条件”探究实验,相信不论是老师还是学生都烂熟于心,值得注意的地方是设计指导处有以下一句话:建议用淀粉酶探究温度对酶活性的影响,用过氧化氢酶探究pH对酶活性的影响。一开始我对这句话没有太在意,没有深究其原因,但结合2012广州地区的高考备考指南中的一道纠错题,才慢慢探讨起原因来。

    这是一道更正实验步骤的题目:

为研究pH对酶活性的影响,某同学设计了如下表所示的方法步骤。

  图片

    标准答案为:

错误1实验操作步骤安排不合理,应将步骤1放到步骤5后面。理由是加入新配置的淀粉酶溶液后立即加入可溶性淀粉溶液,酶会立即与淀粉反应,从而影响实验结果

错误2用于检验结果的试剂选择不恰当,将碘液改为斐林试剂,并通过水浴加热观察现象

错误3缺少pH近中性的对照组,应领取一试管,用蒸馏水代替NaOH溶液(或盐酸溶液),其他不变

    给出的正确方法步骤是:

图片

   我开始纳闷儿,疑惑有二:为什么要将酶反应温度从37改为60?为什么不能用碘液来作为检测试剂?

    经过搜集资料,现总结原因如下:

  1)不同的淀粉酶反应的最适温度不同。唾液淀粉酶、胰淀粉酶为37,但工业用细菌α-淀粉酶最适温度为60

 2)淀粉与碘的蓝色反应在pH=3~5的弱酸性环境下进行最灵敏,5<pH<8次之,当pH>9时不显色(或一开始显蓝色,后不显色)。
这是由于碘会与调节
pH所用的NaOH反应,产生次碘化钠(NaIO)和碘化钠(NaI),使之丧失作为检测试剂的功用。

 3)网上有老师记录了自己利用碘液来检测pH对淀粉酶活性的影响实验的实验现象:淀粉加入5% HCl后加入淀粉酶,经60保温反应,加入碘液后,呈现棕红色。在重复实验后发现甚至会呈现出红色、褐色,且与滴加淀粉酶的时间有关(即淀粉于HCl中存留时间有关)。
这是由于淀粉及其水解产物都能与碘液发生反应,原理是碘分子嵌入淀粉螺旋体中,形成络合物。淀粉与碘生成的络合物的颜色与淀粉的聚合度或分子质量有关:一般来说①
>60个葡萄糖单位时,显蓝色;② 20个葡萄糖单位时,显红色;③ <6个葡萄糖单位时,不能形成螺旋体,不显色。
且淀粉在酸性条件下加热,也会发生自然水解,因此,上述实验中淀粉在
HCl中存留的时间不同,显色也不一样。
即使在强酸环境下,淀粉酶失活,淀粉也可能不与碘产生蓝色反应,而呈现出红色、褐色等,不能准确检测淀粉酶于该
pH值下是否失活。

   4)那么我们是否就能用斐林试剂作为检测试剂呢?答案也是否定的。斐林试剂的CuOH2可与HCl产生中和作用,使斐林试剂失去鉴定作用。即使在酸性条件下淀粉酶具活性,使淀粉水解成还原糖,也检测不出来。

若利用磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液调节pH值,以唾液淀粉酶作实验材料,实验误差可能会减少。

   5)综上所述,用淀粉酶来做pH对酶活性影响的检测实验需要考虑的因素太多,最好的方法还是改变反应底物与酶,用过氧化氢酶催化过氧化氢的分解来完成此实验,这样就能回避选择试剂中需要考虑的种种复杂问题。

    以上资料都是来自于理论,而实际操作是否会产生这些问题还有待于验证。恰巧这个学期要开一门中学实验课程,我们可以选择自己想要做的实验自行操作,接下来便想设计实验解决以下问题:

   1)淀粉在酸性加热条件下不同时间内会发生什么程度的水解?与碘液会产生怎样的显色反应?

  2)淀粉与碘的显色反应在不同pH下有何变化?分别用HCl-NaOH、磷酸盐-柠檬酸盐调节pH对显色反应有无影响。

   3)用斐林试剂检测pH对淀粉酶的影响是否可行?

 

  评论这张
 
阅读(37)| 评论(0)

历史上的今天

在LOFTER的更多文章

评论

<#--最新日志,群博日志--> <#--推荐日志--> <#--引用记录--> <#--博主推荐--> <#--随机阅读--> <#--首页推荐--> <#--历史上的今天--> <#--被推荐日志--> <#--上一篇,下一篇--> <#-- 热度 --> <#-- 网易新闻广告 --> <#--右边模块结构--> <#--评论模块结构--> <#--引用模块结构--> <#--博主发起的投票-->
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

页脚

网易公司版权所有 ©1997-2018